凝膠色譜柱的老化與性能衰減是影響分離效率的關鍵問題，其核心誘因包括填料污染、孔徑堵塞與固定相降解。科學的再生處理可使柱效恢復至初始值的80%以上，顯著延長使用壽命。?
老化特征需精準識別。輕度老化表現(xiàn)為理論塔板數(shù)下降10%-20%，分離度降低但基線仍穩(wěn)定；中度老化時出現(xiàn)峰形拖尾(不對稱因子>1.3)，壓力升高15%以上；嚴重老化則伴隨保留時間漂移(RSD>5%)，甚至出現(xiàn)鬼峰。通過對比新柱與使用中柱的標準品色譜圖，可快速判斷老化程度：聚苯乙烯標樣(分子量104-106)的分離峰若出現(xiàn)重疊或展寬，說明孔徑分布已受影響。?
分級再生策略針對性更強。輕度污染采用梯度沖洗：先以50%甲醇-水沖洗20柱體積，再用純甲醇沖洗10柱體積，較后換回流動相平衡。該方法對蛋白質殘留導致的老化效果好，可使柱效恢復90%。中度老化需使用專用清洗劑：針對疏水性污染物，用四氫呋喃(THF)以0.5mL/min流速沖洗15柱體積；離子型污染物則采用0.1% C?HF?O?反向沖洗，注意壓力需控制在額定值的70%以內。某實驗室數(shù)據(jù)顯示，該法可使受污染的葡聚糖凝膠柱壽命延長6個月。?
深度再生需謹慎操作。對于孔徑嚴重堵塞的硅膠基質柱，可用0.05mol/L硝酸溶液沖洗(適用于pH耐受范圍2-8的柱型)，再用超純水過渡至流動相。聚合物基質柱可嘗試50℃溫水沖洗(溫度不超過填料玻璃化溫度)，利用熱運動促進污染物脫附。但需注意：再生次數(shù)不宜超過5次，否則會導致填料粒徑分布改變，使分離重現(xiàn)性下降。?
日常維護是防老化的核心。每次實驗后立即用10柱體積的純溶劑沖洗，避免樣品殘留；長期停用前，需根據(jù)填料類型保存：硅膠柱用純乙腈封存，葡聚糖柱則需加0.02%NaN?防止微生物滋生。流動相需經(jīng)0.22μm濾膜過濾并脫氣，減少顆粒物與氣泡對填料的損傷。設置柱溫上限(硅膠柱≤60℃，聚合物柱≤80℃)，避免固定相熱降解。?
使用習慣影響老化速率。樣品需經(jīng)0.22μm濾膜過濾，高濃度樣品(>10mg/mL)應稀釋后進樣，避免過載污染。梯度洗脫時，有機相比例變化速率不宜超過5%/min，防止固定相溶脹/收縮過快。實驗間隔超過8小時時，需用低流速(0.1mL/min)維持柱壓，避免填料干涸。某藥企的實踐表明，規(guī)范操作可使凝膠色譜柱的使用壽命從300次進樣延長至500次以上，單次分析成本降低40%。?
實際應用中，需根據(jù)柱型特性調整方案：Sephadex系列適合溫和的aqueous再生體系，而PLgel等有機相柱則需有機溶劑沖洗。通過結合精準的老化判斷、分級再生與預防性維護，可較大化發(fā)揮凝膠色譜柱的性能潛力，為高分子材料分析提供穩(wěn)定可靠的分離平臺。
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